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  • 表达YFP的衣藻的鞭毛被基底黏住,采用TIRF照明时,与基底不在一个焦平面的衣藻细胞体将不会被倏逝波激发产生荧光信号。使得我们可以采用更短的曝光时间和更快的帧速采集得到鞭毛中荧光蛋白的移动。而为了方便的计算来回两个方向荧光蛋白标记的颗粒状结构的转运速度,我们可以采用Reslice方法从视频中方便地得到x-t二维图片,然后代表每个荧光颗粒的斜线的斜率即为其转运的速度。
  • 本作品拍摄的是斑马鱼尾部血管中血细胞的高速流动情况,部分细胞被标记了绿色的荧光。为了区分清楚同时处于高速运动状态的被标记细胞和普通细胞,以及看清楚其具体的行为,我们不仅需要高速采像,而且需要完全同步地拍摄到样品荧光和明场的图像;否则对于这样高速运动的样品,先拍一张明场再拍一张荧光就很难做到细胞的一一对应。而为了达到这些要求,我们采用红光进行明场的拍摄,这样W-View GEMINI双色分光器就可以将红色的明场信号及绿色的荧光信号分光并成像到相机芯片的两边,实现完全同步地荧光和明场成像。而滨松的Flash 4.0 LT sCMOS相机不仅能够实现400帧/秒的高速拍摄,而且其高灵敏度保证了对应的2.5ms曝光时间下荧光图片的清晰。
  • 我们首先通过LPS脑室注射建立了中枢神经系统炎症动物模型 。然后,通过尾静脉将荧光染料(Rhodamine 6G)或者荧光标记抗体(FITC-anti-Gr.1)注射入小鼠体内,小鼠麻醉后用微电钻开颅,手术暴露待观察的脑部血管,通过滨松 sCMOS ORCA-Flash4.0相机录像,再通过软件对细胞招募级联的各参数进行分析。 正常健康情况下,小鼠脑血管中几乎观察不到粘附和滚动的白细胞,但是在中枢神经系统炎症状态下,可在小鼠脑血管中观察到粘附和滚动的白细胞。(在30s内静止粘附在脑血管内皮细胞表面的白细胞即定义为粘附的白细胞;在100um血管段内,速度小于血流速度可看清细胞形态的即为滚动的白细胞)
  • 本案例以成年C57小鼠急性分离所得心肌细胞在脉冲电刺激下的搏动为例,对于明场高速成像的数据进行时间序列分析。