衣藻鞭毛中荧光蛋白转移的TIRF成像_滨松光子学商贸(中国)有限公司

衣藻鞭毛中荧光蛋白转移的TIRF成像

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本网页为滨松绝对量子产率分析仪Quantaurus-QY在实际使用中的FAQ。

所用相机：
        Flash 4.0 V2 USB(C11440-22CU)
成像方法：
        TIRF成像，高速运动荧光成像
显微物镜：
        100x TIRF Oil，NA 1.49

拍摄条件：
50帧/秒，20ms曝光时间

# 详细描述

表达YFP的衣藻的鞭毛被基底黏住，采用TIRF照明时，与基底不在一个焦平面的衣藻细胞体将不会被倏逝波激发产生荧光信号。使得我们可以采用更短的曝光时间和更快的帧速采集得到鞭毛中荧光蛋白的移动。而为了方便的计算来回两个方向荧光蛋白标记的颗粒状结构的转运速度，我们可以采用Reslice方法从视频中方便地得到x-t二维图片，然后代表每个荧光颗粒的斜线的斜率即为其转运的速度。下图B和C显示了两种显示效果比较好的后处理结果（关于如何从原始数据得到这样的图像后处理结果，可参考: http://www.hamamatsu.com.cn/activity/10001/news/10032/index.html）。

扩展阅读：图B类似的后处理方法在神经生物学研究中的应用可参考下列文献的Figure 2，3，5和6: Lasiecka, et. al., Neuronal early endosomes require EHD1 for L1/NgCAM trafficking, J Neurosci. 2010 Dec 8; 30(49): 16485–16497.

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